Identificació microbiana (MALDI-TOF)

Informació tècnica

Utilitat

Identificar un microorganisme a nivell de gènere i espècie. La procedència del microorganisme aïllat pot un cultiu ambiental o bé un cultiu de component sanguini, de llet, teixits, teràpia cel·lular, teràpia avançada, etc.

Mètode

Hi ha diversos mètodes per identificar un microorganisme, els quals poden ser complementaris:

• Estudiar les característiques fenotípiques:

  • Morfologia microscòpica (tinció i observació al microscopi)

  • Metabolisme (proves bioquímiques)

  • Composició antigènica (estudis serològics)

  • Composició biomolecular (MALDI-TOF)

• Estudiar les característiques genotípiques:

• Genoma (Seqüenciació, PCR)

MALDI-TOF: De les sigles en anglès MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization) i TOF (Time-Of-Flight). MALDI-TOF és una tècnica d'ionització suau que colpeja molècules grans amb energia làser i allibera fragments ionitzats. El principi de mesura es mostra a la il·lustració 1 i 2.

La mostra a analitzar és barreja o es recobreix amb un compost orgànic que conté una solució absorbent anomenada matriu. La matriu funciona com a absorbent d'energia a la irradiació làser. Els compostos de la matriu amb l'analit es dipositen sobre una placa que està formada per un metall conductor. A continuació, amb un raig làser, la mostra s'ionitza. Les molècules de la matriu desorbeixen i s'ionitzen energèticament en presència d'un raig làser i generen les molècules d'analit a la fase gasosa. Els ions s'acceleren i es separen en funció de la seva massa i relació de càrrega. Les molècules d'ions de mida petita acceleren més ràpidament que els ions de mida gran. A continuació, aquests ions són detectats i es mesuren mitjançant l'analitzador de temps de vol (TOF).

El principi bàsic de l'analitzador TOF és que determina el temps que requereix l'ió en recórrer la longitud del tub de vol. Els ions de mida petita i càrrega lleugera viatgen més ràpidament cap al detector que els més grans i més pesats. La detecció dels ions genera un espectre específic, el qual es compara amb la base de dades per determinar quina és la identitat del microorganisme.

Algoritme diagnòstic

En cas de detectar creixement microbià, es procedeix a fer la identificació del microorganisme per MALDI-TOF. Per tant, aquesta prova s'afegeix quan el cultiu és positiu.

Resultats

El resultat esperat és la identificació a nivell de gènere i espècie. En alguns casos es pot obtenir només identificació a nivell de gènere. Si el microorganisme no està a la base de dades, s'han d'emprar altres mètodes per realitzar la identificació.

Precaucions

Cal disposar d'un cultiu pur del microorganisme per identificar-lo.

Temps de resposta

• 1-2 dies

Informació sobre l’espècimen

Mostra: Producte o cultiu ambiental

Tubs: Segons el producte (veure les fitxes de les proves de cada tipus de cultiu)

Estabilitat: Transportar tan aviat com sigui possible al laboratori.

Instruccions de transport: Temperatura ambient.

Motiu de rebuig: Mostra no identificada, etiqueta il·legible, etc.

Informació administrativa

Codi BST: Identificació i antibiograma aerobi (61033) o Identificació i antibiograma anaerobi (61030)

Codi BST antic: Identificació i antibiograma aerobi (7575) o Identificació i antibiograma anaerobi (7572)

Descripció de la prova: Identificació i antibiograma aerobi, Identificació i antibiograma anaerobi

Sinònims: Identificació microbiana, identificació de bacteris, identificació de fongs

Secció: Microbiologia

Tarifa BST: Consultar les tarifes actualitzades aquí.

Perfils
No aplica

Referències

• Guide to the quality and safety of tissues and cells for human application. 5th edition EDQM, 2022

• Farmacopea Europea 11ena edició, 2023