Control d’esterilitat (bact/alert)

Informació tècnica

Utilitat

• La contaminació bacteriana o fúngica dels productes d'origen humà (SoHo) pot produir morbiditat i mortalitat en els receptors. Les possibles fonts de contaminació inclouen bacterièmia asimptomàtica del donant en el moment de la donació i l'execució incorrecta de les tècniques asèptiques durant la producció.

• La Farmacopea Europea preveu en el capítol 2.6.27 que es puguin utilitzar mètodes automàtics de control d'esterilitat. El sistema BACT/ALERT® utilitza un principi de detecció basat en el diòxid de carboni generat pel creixement microbià associat al metabolisme dels substrats del medi de cultiu, que es tradueix en un canvi de pH, i finalment, provoca un canvi de color irreversible de l'indicador del fons del flascó. Aquest sistema és avantatjós pel que fa a la rapidesa que proporciona en la detecció i recuperació microbiana, ja que s'obtenen els resultats en un temps màxim de 14 dies a través de la lectura continuada i, a més, la notificació de mostres positives és immediata. Les mostres a analitzar es sotmeten a una manipulació mínima ja que només es necessita inocular els flascons i introduir-los a l'armari BACT/ALERT per a la seva incubació. La lectura del color és automàtica, no hi ha interferències per terbolesa i és un mètode no destructiu que permet una identificació microbiana posterior i antibiograma, si s'escau.

• La utilitat d'aquesta tècnica és realitzar el control d'esterilitat de productes que han de ser estèrils, per exemple components sanguinis (plaquetes, concentrats d'hematies), sang de cordó umbilical, afèresis, teràpies cel·lulars i teràpies avançades, teixits, materials de partida, medis, reactius, etc.

En els flascons amb atmosfera aeròbia, s'afavoreix el creixement de microorganismes aerobis (bacteris i fongs). En els flascons amb atmosfera anaeròbia, s'afavoreix el creixement de microorganismes anaerobis i anaerobis facultatius. Es pot inocular entre 1 i 10 mL de mostra a cada flascó, sempre que sigui possible s'inocularà el màxim.

Mètode

BACT/ALERT (Figura 1) és un sistema automatitzat de detecció microbiana que ofereix un entorn adequat per al creixement d'una àmplia gamma de microorganismes, inclosos bacteris i fongs. BACT/ALERT es pot programar per incubar a diferents temperatures durant diferents períodes de temps. Generalment els flascons s'incuben dins el mòdul incubador a 37ºC o 32 ºC durant 7 o 14 dies, segons el tipus de flascó, per a detectar el possible creixement de microorganismes contaminants: bacteris aerobis, anaerobis, fongs filamentosos o llevats.

L'equip controla el temps d'incubació pre-programat segons el tipus de flascó reconegut per lectura de codi de barres. L'instrument llegeix els flascons cada deu minuts i detecta el creixement pel canvi de pH que genera el creixement microbià, el qual provoca un canvi de color de l'indicador del fons del flascó. Quan l'autòmat detecta una mostra positiva, genera un avís visual i sonor.

S'utilitzen diversos tipus de flascons per al cultiu de microorganismes depenent del producte a estudiar. Les seves característiques es resumeixen a la Taula 1.

Els flascons que porten la lletra i han superat un control de qualitat de lot de fabricació extensiu que els fa aptes per ús seguint normes de correcta fabricació (GMP).

Taula 1: Quadre resum dels tipus de flascons

Abans de la utilització d'un lot de flascons BACT/ALERT cal demostrar la seva fertilitat mitjançant un test de promoció de creixement, tal com indica la Farmacopea.

La inoculació dels flascons BACT/ALERT es fa, sempre que sigui possible, en les sales blanques a càrrec dels equips de producció de components sanguinis, teixits, teràpia cel·lular o avançada. En cas que no sigui possible, la inoculació es fa en cabines de flux laminar al laboratori de microbiologia, mitjançant connexió estèril i tècnica asèptica. Breument, el procediment consisteix en:

1. Dintre de cabina, treure el tap protector de cadascun dels flascons.

2. Aplicar la solució alcohòlica IPA al tap de goma de cada flascó de BACT/ALERT i deixar assecar 10 minuts.

3. Inocular primer el flascó per a cultiu anaerobi i després el flascó per a cultiu aerobi, per tal d'evitar injectar aire que conté oxigen en el flascó anaerobi.

4. Injectar la mostra amb molta cura controlant l'èmbol de la xeringa, ja que existeix pressió negativa dins dels flascons que podria fer que el contingut de la xeringa sigui aspirat totalment.

5. Després d'injectar la mostra i abans de treure els flascons de l'ambient estèril de la cabina de flux laminar, es torna a desinfectar el tap dels flascons.

Aquest mètode ha estat validat pel Banc de Sang i Teixits per cadascuna de les matrius i el codi de validació és V-LC-020 i V-LMB-007.

Algoritme diagnòstic

En cas de detectar creixement microbià, es procedeix a fer una tinció de Gram, sembrar en placa i fer la identificació del microorganisme per MALDI-TOF.

Resultats

El resultat esperat en productes estèrils és la manca de creixement microbià, és a dir, un resultat NEGATIU de BACT/ALERT.

Precaucions

S'observen els flascons abans d'introduir-los a l'armari: el color del fons s'ha de comparar amb un flascó negatiu de referència. Si el color ja és més groc que la referència, s'ha de considerar el flascó com a positiu i seguir la tècnica de tractament de positius.

Temps de resposta

• 7-14 dies, segons el protocol sol·licitat

Informació sobre l’espècimen

Mostra: Producte del qual es vol verificar l'esterilitat

Tubs: Flascó BACT/ALERT (veure detall a la Taula 1 i Taula 2)

Estabilitat: Transportar tan aviat com sigui possible al laboratori.

Instruccions de transport: Temperatura ambient.

Motiu de rebuig: Flascó no identificat, etiqueta il·legible, etc.

Informació administrativa

Codi BST: Veure Taula 2

Codi BST antic: Veure Taula 2

Descripció de la prova: Veure Taula 2

Sinònims: Hemocultiu, Control d'esterilitat, BACT/ALERT

Secció: Microbiologia

Tarifa BST: Consultar les tarifes actualitzades aquí.

Taula 2: Quadre resum de proves

Perfils
No aplica

Referències

• Guide to the quality and safety of tissues and cells for human application. 5th edition EDQM, 2022

• Farmacopea Europea 11ena edició, 2023

• Estándares en hemoteràpia CAT

• FACT-JACIE International Standards for Cellular Therapy Product Collection, Processing, and Administration.

• NETCORD-FACT International Standards for Cord Blood Collection, Banking, and Release for Administration.

• NCF: Guía de Normas de Correcta Fabricación de Medicamentos de Uso Humano y Veterinario. Anexo 1

• NCF Parte IV: Directrices sobre normas de correcta fabricación específicas para Medicamentos de Terapia Avanzada.

• GpG. Directrices de Buenas Prácticas - Guía para la preparación, uso y control de calidad de los componentes sanguíneos.

• Guia de l'usuari del BACT/ALERT 3D (Biomérieux)

• Instruccions dels flascons iFA Plus, iFN Plus, FA Plus, FN Plus, BPA, BPN, iAST, iASN

Qualitat

El BST té les certificacions de qualitat ISO 9001, ISO 14001, OSHAS 18001 i el segell d'Excel·lència Europea 500+. El BST està acreditat per CAT, JACIE-FACT, FACT-NETCORD i EFI, compleix les directrius de les Normes de Correcta Fabricació i les Normes de Correcta Distribució.