Quantificació/viabilitat CD34 i CD45 ISHAGE
Informació tècnica
Utilitat
Aquesta prova permet quantificar i determinar la viabilitat de les cèl·lules progenitores hematopoètiques (CD34+CD45low). Utilitza els marcadors:
- Receptor de membrana CD45 com a marcador leucocitari.
- Receptor de membrana CD34 que marca progenitores hematopoètiques.
- 7AAD com a marcador de viabilitat.
Aquesta determinació segueix el mètode ISHAGE (International Society of Hematology and Graft Engineering) que es va desenvolupar per a la quantificació de les cèl·lules CD34+ mitjançant plataforma única. Es tracta d’una metodologia citomètrica en la qual es combinen 5 paràmetres: mida i complexitat cel·lular, expressió de CD34, expressió de CD45 i marcatge de DNA amb 7-aminoactinomycin D (7AAD) per al marcatge i exclusió de les cèl·lules mortes. Aquests paràmetres són combinats en una estratègia seqüencial de gateig Booleà que permet seleccionar la població CD34+CD45low.
És una determinació que s’utilitza com a control de qualitat d’unitats de sang de cordó umbilical i productes per transplantament de progenitors hematopoètics.
Mètode
Citometria de flux amb el marcatge específic dels anticossos monoclonals, CD45-FITC i CD34-PE, seguint el mètode ISHAGE. Els anticossos s’uneixen a les cèl·lules que expressen CD45 i/o CD34, permetent separar-les de la resta de cèl·lules. El 7AAD s’uneix al DNA de totes les cèl·lules mortes. El recompte es realitza amb microesferes de recompte.
Algoritme diagnòstic
En mostres de moll d’ós o afèresis de pacients pediàtrics, per tal de poder seleccionar correctament la població de cèl·lules progenitores, es realitza també un marcatge amb anticossos monoclonals anti-CD10 i CD19 (Perfil 20809) que permet diferenciar les cèl·lules progenitores hematopoètiques dels precursors limfoides.
Resultats
Els resultats són quantitatius: concentració cel·lular i % de viabilitat. Les concentracions de CD34 i CD45 poden ser molt variables en funció del tipus de mostra/producte i de si provenen d’un donant sa o d’un pacient. Pel que fa a la viabilitat cel·lular, els valors esperats són els següents:
| Mostra | Viabilitat CD45 | Viabilitat CD34 |
|---|---|---|
| Progenitors fresc (MO o afèresis) | ≥95% | ≥95% |
| Progenitors descongelat (MO o afèresis) | ≥70% | ≥70% |
| SCU fresc | ≥85% | ≥85% |
| SCU descongelat | ≥40% | ≥70% |
Precaucions
No Aplica.
Temps de resposta
1 dia.
Informació sobre l’espècimen
Mostra: Sang perifèrica, sang de cordó umbilical, moll d’os, afèresis.
Tubs: Tub EDTA K3 (sang perifèrica) o Tub sense additiu (mostres anticoagulades).
Volum mínim: 0.5mL
Estabilitat:
- A temperatura ambient: 1 dia
- En refrigeració: 1 dia
- Criopreservat entre -156ºC i -196ºC: 20 anys
Instruccions de transport:
- Sang perifèrica i moll d’os, preferiblement a temperatura ambient
- Sang de cordó umbilical i aféresis, preferiblement refrigerades a 2-8ºC
Motiu de rebuig: Mostra molt hemolitzada o amb coàguls.
Informació administrativa
Codi BST: 20825
Codi BST antic: CEL007
Descripció de la prova: Quantificació i viabilitat de cèl·lules CD45+ i CD34+.
Sinònims: ISHAGE
Secció: Cel·lular
Tarifa BST: Consultar les tarifes actualitzades aquí.
Perfils
Aquesta prova es pot sol·licitar sola, però també es realitza dins de perfils.
Referències
- Single platform flow cytometric absolute CD34+ cell counts based on the ISHAGE guidelines. Keeney M, Chin-Yee I, Weir K, et al. Cytometry 1998;34:61-70.
- Sutherland DR, Keeney M, Gratama JW. Enumeration of CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells. Current Protocols in Cytometry. 2003;25(1):6.4.1-6.4.23.
- Sutherland R; Enumeration of CD34+ Cells by Flow Cytometry; Cellular Therapy: Principles, Methods, and Regulations, Chapter 56, 2nd Edition, AABB, 2016.
- FACT-JACIE International Standards for Cellular Therapy Product Collection, Processing, and Administration.
- NETCORD-FACT International Standards for Cord Blood Collection, Banking, and Release for Administration.
